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动物源性食品中细菌的检测——链球菌

时间:2021-08-10    点击: 次    来源:中国兽医发布    作者:曲志娜 赵思俊等 - 小 + 大

  1.5.3 γ-链球菌
  不产生溶血素,菌落周围无溶血环,也称为丙型或不溶血性链球菌,该菌无致病性,常存在于乳类和粪便中,偶尔也引起人或动物感染。
  1.6 抵抗力
  该菌抵抗力一般不强,60℃经30min即被杀死,对常用消毒剂敏感,在干燥尘埃中可生存数月。乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、磺胺均敏感。βG内酰胺类药物是链球菌感染的首选药物。
  2 流行病学特征
  链球菌在自然界中分布较广,存在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中,可通过直接接触、空气飞沫传播感染或通过皮肤、黏膜伤口感染,被污染的食品如肉、蛋、乳及其制品也会感染人类。上呼吸道感染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品污染的污染源。
  3 危害
  链球菌种类多,与人类有密切关系的是猪链球菌。在猪链球菌众多血清型中,2型链球菌是猪的最主要病原,致病性最强。链球菌的致病性与溶菌酶释放蛋白、胞外蛋白因子、溶血素等毒力因子有关。
  在我国,2005年四川部分地区发生的2型猪链球菌病暴发流行导致200多人感染、38人死亡。在荷兰,每年屠宰场的工人和养殖场饲养员患猪链球菌脑膜炎的比率大约为3/100000,是不在屠宰场工作的人患猪链球菌脑膜炎的1500倍,屠夫患猪链球菌脑膜炎的比率为1.2/100000。在德国,屠夫、屠宰场工人和肉品加工厂工人是猪链球菌在鼻咽部定居的高危人群。在新西兰,1980年以后的研究显示9%的奶牛场主、10%的肉品检验员及21%的猪场主对猪链球菌2型血清反应为阳性,表明一些人有亚临床感染。
  4 检测方法
  包括病原的分离鉴定方法及分子生物学方法、免疫学方法ELISA等。
  4.1 分离鉴定方法
  4.1.1 样品处理
  取25g(或25mL)待检样品,加入225mL灭菌生理盐水,制成混悬液。
  4.1.2 接种培养
  吸取5mL混悬液接种至50mL葡萄糖肉浸液肉汤中,或直接划线于血平板上(如待检样品污染严重,可同时接种5mL至匹克氏肉汤中),36℃培养24h,接种于血平板上,36℃培养24h,挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落,在血平板上分纯,观察在液体和固体中的培养特征、溶血情况及革兰氏染色、形态,并进行环磷酸腺苷(CAMP)试验、链激酶试验和杆菌肽敏感试验。
  4.1.3 CAMP试验
  在血琼脂平板上用金黄色葡萄球菌培养物划一条直线,然后将链球菌培养物划一条线,与金黄色葡萄球菌培养物的划线相互垂直,但不要接触,二者相距3~5mm,各链球菌分离菌划线间距10~20mm。置37℃温箱内培养24h后观察结果。在两划线交界处出现箭头样的溶血区为阳性。
  4.1.4 链激酶试验
  吸取草酸钾血浆0.2mL,加0.8mL灭菌生理盐水,混匀,再加入链球菌18~24h36℃肉浸液肉汤培养物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL,混匀,36℃水浴10min,血浆混合物自行凝固,观察凝块重新完全溶解的时间,完全溶解为阳性,如24h后不溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照,用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。

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