脂质体作为疫苗免疫佐剂的应用研究进展

时间：2012-11-10 点击：次来源：阳光畜牧网作者：阳光畜牧网 - 小 + 大

    4.2 病毒疫苗的应用
    禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)血清型多、突变性高，常规免疫预防很难达到预期的效果，为此国内外许多学者就着手从该病的基因免疫入手。目前，国内的陈吉祥、李广林等[11]用改良的逆相蒸发法制备并检测了H7亚型禽流感保护性抗原血凝素(haemagglutinin,HA)基因重组质粒pSVH7脂质体的理化特性。试验通过重组质粒扩增、脂质体制备、电镜观察、琼脂糖电泳、脂质体的核酸酶解、紫外吸收等方法证明PSVH7脂质体粒径大小、分布均匀，符合要求；脂质体与质粒完全结合，不影响质粒DNA的完整性和稳定表达；同时，制备的脂质体能长期稳定保存，使长途运输成为可能。
    Iinuna用胞壁酰二肽MDP脂质体包裹流感病毒H3N2，免疫小鼠后，小鼠脾细胞可明显降低转移至小鼠肺中的病毒滴度，表明MDP脂质体疫苗可通过增强细胞免疫来保护小鼠抵抗流感病毒攻击。Childers等将变异链球菌中的葡萄糖基转移酶(glucosyltransferase,GTF)脂质体制成肠溶胶囊，给7名健康成人口服，每人每天500 μg，连用3 d，28 d后再加强一次，结果5人的腮腺分泌物中抗GTF的IgA1和IgA2水平增加，第35天时达高峰，表明脂质体疫苗经口服后可诱导机体产生分泌型IgA抗体。脂质体作为疫苗佐剂可同时增强机体的体液免疫和细胞免疫[12]。
    目前，医学上应用于病毒类脂质体佐剂的疫苗主要有人类免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus,HIV）脂质体疫苗、流感脂质体疫苗及乙型肝炎脂质体疫苗等。
    4.3 抗寄生虫疫苗的应用
    寄生虫方面现在已应用疟疾脂质体疫苗及利什蔓原虫脂质体疫苗。疟疾脂质体疫苗经志愿者临床试验表明有高度免疫原性和安全性，能产生抗原特异性抗体和CTL。Afrin等用阳离子、中性、阴离子脂质体分别包裹利什曼原虫前体鞭毛蛋白抗原,发现都能诱导非常明显的保护作用，接种动物主要表现为抗原特异性DTH和抗体应答增强。
    4.4 抗肿瘤疫苗的应用
    Eppstein D A等[13]制备的IFN-α脂质体比游离IFN-α显著抑制膀胱癌细胞253J的生长，且对IFN-α有抗性的变异株也有敏感作用。Fraser-Smith E B等[14]报道胞壁酰二肽(MDP)包裹于脂质体后对小鼠白色念珠菌病疗效提高了15倍～70倍，脂质体包封的巨噬细胞活化因子（macrophage activating factor,MAF）可在低于游离MAF至少2 000倍的浓度下激活离体巨噬细胞的杀肿瘤活性，并可提高体内巨噬细胞的抗肿瘤活性。
    5 脂质体作为疫苗佐剂可能出现的问题及解决办法
    （1）脂质体作为疫苗佐剂虽然能够诱导机体产生良好的免疫应答，但也有部分轻微副反应。
    （2）一些脂质体疫苗的制备工艺有待完善，如成本高，只能用于低分子量抗原（不包括可溶性和颗粒性疫苗）或需去污剂、超声处理或有机溶剂等，这些恰好不利于开发某些具有结构活性的大分子量制剂或生物活性物质。 Gregoria实验室建立了一套制备脂质体疫苗的工艺可避免上述缺陷。该工艺制备的脂质体疫苗具有一定的稳定性，而且这类脂质体可以阻止相应抗原与体内预先形成的抗体或来自母体的抗体之间的竞争作用，因此是较为理想的免疫佐剂[15]。
    （3）包封率不均一。脂质体对不同物质的包封率差别很大，对有些物质的包封率很低，这就很难发挥疫苗的作用，随着对脂质体研究的深入，针对脂质体的包封率也提出了许多解决办法。硫酸铵梯度法类似于pH梯度法，它使用一定浓度的硫酸铵溶液，在脂质体内外相之间制造一定浓度的硫酸铵梯度。此外，还可以通过优化脂质体处方或适当加入与疫苗带有相反电荷的类脂成分，提高疫苗的包封率[16]。
    （4）疫苗与脂质体研究领域相对脱节，导致脂质体作为疫苗佐剂发展缓慢，今后应该加强这两个领域的结合与沟通，使脂质体作为一种新型的疫苗佐剂能得到快速发展。
    6 脂质体的改进与应用前景
    脂质体作为疫苗佐剂虽然有很多优点，但到现在为止，脂质体还仅处于实验室阶段，究其原因可能是由于原料及制备上的问题所致。
    脂质体佐剂存在的主要问题[17]:①磷脂中的不饱合脂肪酸贮存时会逐渐氧化,产生溶血磷脂,这种溶血磷脂若当其含量超过磷脂总量的1%时,将离开脂质体并破坏其他脂质体膜；②小脂质体倾向于相互融合成大脂质体,在融合过程中可导致包入的抗原释放。
    科学家们一直在研究如何改进磷脂脂质体的不足。1989年，Micro-Vesivular Systen (MVS)公司发明了一种新型脂质体，具有不寻常的稳定性和运载能力，称为Novasome[18]。用于制备Novasome的原料是亲水亲脂两性分子，因Novasome由单链分子制得，因而与传统磷脂脂质体相比有其特征：①分子结构单一纯净，种类多，可挑选。分子中无不饱和键，不存在氧化破裂问题，故Novasome的稳定性良好；②Novasome的膜结构由数层脂双层（约6 nm厚）组成，直径0.1 μm～0.5 μm。磷脂脂质体当温度在磷脂相变温度Tc上下变化时，会产生晶态与液晶态之间的相变过程，这个过程在Novasome中则要温和的多；③Novasome的包封体积大，可达11 L/mol～35 L/mol，而常用的磷脂MLV仅为1 L/mol~4 L/mol；④磷脂脂质体制备时通过高压挤压、超声处理等方法来控制脂质体的大小。而Novasome的大小可由所用原材料及制备时所用喷嘴直径来控制，比较方便和准确[19]。
    Novasome在原料的均一和稳定性、价格低廉、大规模制备方法的成熟等方面，均克服了传统磷脂脂质体的不足，但又保留了后者作为免疫佐剂的功能优点，因此展现了其实用性和进一步发展的良好前景。

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