非洲猪瘟的诊断和防治研究进展

摘要：非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是一种病毒性、出血性疾病，对家猪和欧亚野猪的致死率极高。本文介绍了非洲猪瘟诊断的现有技术和障碍，并就防控策略进行了论述，最后介绍了非洲猪瘟疫苗研究存在的难点以及就进一步研究的方向。

关键词：非洲猪瘟；诊断；防治；疫苗

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是一种病毒性、出血性疾病，对家猪和欧亚野猪具有极高的致死率。尽管引发该病的病毒——非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)的宿主范围有限，也不可能会引发人畜共患病，但其对社会、经济的影响非常大，许多利益相关者都被牵涉其中。出于这个原因，一旦猪群暴发该病，发病地的相关行业管理部门应向世界动物卫生组织通报。目前，对非洲猪瘟的控制仍依赖于严格的卫生措施，因为现今既没有获得许可的疫苗，也没有任何有效的治疗方法。

1  非洲猪瘟的诊断

1.1 目前的技术水平和障碍

在实际生产中，当对ASF执行早期预警、及时干预和监测时，采用快速和可靠的诊断方法极为重要。好的检测方法应能够检测ASFV的所有基因型和突变体，具有高灵敏度和特异性，应根据世界动物卫生组织的指南验证，且易于操作，能够快速解释检测结果。另外，应始终以合理的价格提供，能适应于高通量的应用。这种检测需要伴随潜在的能够区分野毒株感染动物和疫苗接种动物(differentiating infected from vaccinated animal，DIVA)。显然，并非所有的特性都能同时满足，为此，应建立诊断工作流程，考虑所用检测方法的优点和缺点。这可能包括使用栏边检测法(pen-side approaches)，也包括替代性或非侵入性的采样策略。后者对诊断野猪群是否感染ASF具有特殊意义。最近研究人员探讨了通过猪的唾液、拭子样本或诱饵来检测病原体，并证明这些方法可用于猪瘟的检测。

由于需要向世界动物卫生组织通报，相关建议和法律都对实验室诊断进行了规定。诊断方法和准则可在《世界动物卫生组织陆生动物诊断试验和疫苗手册》(OIE，2019)，或欧盟ASF参考实验室官网(https://asf-referencelab.info/asf/en/procedures-diagnosis/sops)上找到。鉴于ASF在一些欧盟成员国，特别是在西班牙和葡萄牙的历史意义，针对非洲猪瘟的诊断指南和法律条文已经相当成熟，欧洲以外的国家可以直接借鉴这些指南和法律条文。

总的来说，现有针对ASF的可靠的直接和间接诊断方法对家猪和野猪的特定样本都能发挥作用。当检测来自家猪或野猪的高质量样本时，检测的准确性没有差别(它们实际上是同一物种)。这些检测方法包括从猪巨噬细胞分离病毒、(实时)聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)、酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assays，ELISA)、免疫印迹和间接免疫染色标记技术。然而，直到最近，这些测试方法中的大部分都是建立在“内部”准则基础上的，只有通过使用实验室间的对比测试才能保证检测结果的可比性。对于资源有限的国家而言，经过充分验证和易于使用的测试系统才有利于推广使用。在这里，定价合理且不需要额外耗材的商用试剂盒是关键。

目前的情况和以方法论为导向的研究项目已经促使这种情况有所改善，一些ELISA、实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR，qPCR)以及侧流检测(lateral flow assay，LFA)试剂盒已经进入市场。事实上，用于诊断ASF的商用PCR方法和ELISA方法的种类越来越多，制造商分布在全球各地。虽然大多数检测都能正常工作，但并不总是存在可比较的数据。由于德国对该国用于法定动物传染病和须报告动物传染病的任何检测试剂盒都有官方许可程序，因此此类试剂盒有基本的数据，并且可以在德国官方收集的法定动物传染病的检测方法(https://www.fli.de/en/publications/amtliche-methodensammlung/)中总是可以找到最新的清单。到目前为止，德国已经批准了8种商用实时PCR方法，并在地区实验室中用于排除性诊断和监测。所有这些检测方法都已在德国国家参考实验室(national reference laboratory，NRL)用一组确定的实验样本进行了测试，这些样本代表ASFV的不同基因型(主要是ASFV基因Ⅰ型和Ⅱ型)、宿主物种、基质和感染状态。Schlottau已经在德国国家实验室对其中一些商用PCR方法和三种日常使用的自动提取方法进行了更详细的比较。根据制造商提供的使用说明书，在KingFisher提取平台(Thermo Fisher Scientific)上使用NucleoMag? VET(Macherey-Nagel)、MagAttract Virus M48(Qiagen)和MagMAXTM CORE(Thermo Fisher Scientific，workflow C)试剂盒提取核酸。总的来说，所有的试剂盒都是合适的，在下游应用中可以给出可靠的结果。在PCR试剂盒方面，King等对virotype ASFV PCR试剂盒、INgene q PPA试剂盒、RealPCR ASFV DNA和ID GeneTM非洲猪瘟Duplex进行了相互之间的比较同时与世界动物卫生组织推荐的检测法进行比较。所有的试剂盒都能给出可靠的结果，但在使用不能令人信服的样本时有略微的差异。最近，Schoder等发表了用7种市售PCR试剂盒和3种PCR组合试剂盒检测样本中ASFV的比较数据，这些试剂盒分别为：virotype ASFV 2.0 PCR试剂盒，Adiavet ASFV Fast Time，Bio-T kit ASFV，VetMax ASFV 检测试剂盒，RT-PCR ASFV DNA Test，VetAlert ASF PCR检测试剂盒，以及ID GeneTM ASF Duplex。简而言之，研究人员在2018—2019年ASF疫情暴发期间，对比利时收集的300份特征明显的野猪样本进行了敏感性和特异性测试。这项研究证实，所有商用试剂盒和三分之二的Taq聚合酶适用于诊断实验室进行ASFV检测。这与上述经验相符，并证实了商用试剂盒适用于快速和用户友好型诊断。

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