时间：2012-11-10 点击： 次 来源：阳光畜牧网 作者：阳光畜牧网 - 小 + 大
1998年Triyatni等将鸭乙肝病毒(DHBV)的preS和s基因质粒DNA疫苗肌肉注射北京鸭，免疫3次，间隔3周。第3次免疫后，所有免疫鸭都产生preS和s的抗体，但只有s质粒DNA免疫的鸭可抵抗鸭肝炎病毒的攻击。 1999年刘毅等分别构建了含IBDV-VP243目的基因的重组鸡痘病毒亚单位疫苗和基因疫苗真核表达质粒，将两种疫苗分别经翅膀刺种和肌肉途径注射1周龄SPF鸡，用vvlBDV攻击的结果表明两种疫苗都能产生保护力。同年Foder等将IBDV D78株和GP40株的VP2基因和D78株的VP2-VP3一 VP4基因质粒DNA分别通过(肌肉、腹腔内)两种途径接种小鸡，2周后加强免疫一次，第6周用致死量的IBDV攻击，观察结果表明VP2基因质粒DNA疫苗没有起到免疫保护作用，而VP2-VP3一VP4基因质粒DNA疫苗有明显的免疫保护作用。 2000年步志高等将IBDV D78株VP2基因插入真核表达质粒pCI CMV启动子下游多克隆位点，构成pCI VP2。用3周龄SPF鸡DNA免疫。试验鸡每羽腿部肌肉注射pCI VP2100μg，2周后加强免疫一次；二免2周后，人工感染vvlB— DV。结果表明，VP2基因DNA免疫可诱导SPF鸡产生中和抗体，并形成对IBDV超强毒株致死攻击的免疫保护，虽不能阻止临床发病及法氏囊病理损伤发生，但有可能减缓法氏囊病理损伤程度。步志高等还用ORE完整的鸡传染性支气管炎 IBV类M41株SI基因cDNA插入真核表达质粒pCI启动子下游多克隆位点，构成pCISI用于l周龄SPF雏鸡的免疫试验。试验鸡每羽腿部肌肉注射pCISI DNA 100μg，2周后加强免疫一次。二次免疫2周后，人工感染IBVH52株。结果，IBV人工感染后第4天气管、泄殖腔棉拭子分离阳性者，免疫试验组为1／6，而对照组为6／6；鸡胚病毒中和试验显示，二次免疫后 I临感染前及感染后l周龄混合血清中和抗体效价试验组均为阳性，而对照组均为阴性，试验表明，IBVSI基因DNA免疫可诱导SPF鸡产生特异的IBV中和抗体，并可有效形成阻止相同血清型IBV感染后机体排毒的免疫保护。同年孟松树等将分别构建的含有鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)王岗株gB、gC和gD基因的重组真核表达质粒及空载体分组肌肉注射雏鸡，攻毒后观察免疫保护效果。结果表明，重组质粒诱导了免疫应答，免疫保护率为79％，该基因疫苗可以为预防AILT的一个补充。此外，Rollier等在同年以鸭乙肝病毒为模型研究了大囊膜蛋白(L)的DNA免疫引起的母源抗体的保护力。将含有DHBV L蛋白基因的DNA疫苗免疫种鸭后，在蛋黄中积累有大量产生的抗体可垂直传播并可保护后代免受DNBV的攻击。 2001年Chang等将IBDV标准强毒株(STC)的VP2、 VP3和VP4基因插入表达质粒pCR3．1构成pCR3．1．VP234． STC，肌肉注射1日龄鸡，试验鸡分为D1、D2、D3 3组，每组接种次数依次为l、2、3次(每次间隔1周)，在试验鸡3周龄时用IBDV标准毒株(sTC)攻毒，观察10 d，发现D2组免疫保护率达50％一100％，D3组达80％～100％，D3组表现不同程度的法氏囊萎缩。同年姜永厚等利用国内首次克隆到雏鸡1L-2基因与ND弱毒DL6株的F基因构建了共表达鸡 IL-2和ND F蛋白的重组真核质粒，为探讨禽类重组基因疫苗的构建及鸡IL-2在基因疫苗中的作用奠定了基础。 2003年梁雪芽等将含新城疫病毒(NDV)F48E9株融合蛋白(F)基因的真核表达质粒pc DNA 3 F的减毒鼠伤寒沙门氏菌zJlll株(zJlll pc DNA 3 F)口服接种小鼠和雏鸡。结果表明：利用该减毒株作为载体传递DNA疫苗具有相对安全性。用酶切和PCR鉴定法证实在体内外无抗生素存在的条件下重组质粒在受体菌ZJl ll菌株内比较稳定。ZJl 11 pc DNA3 F以每羽10 8cfu免疫雏鸡，2周后二免，二免后4周攻击致死剂量的强毒株F48E9，观察其免疫效力。结果表明：重组 ZJl 11 pcDNA3 F菌株不仅能诱导雏鸡产生抗NDV抗体，而且能诱导法氏囊B淋巴细胞和胸腺T淋巴细胞的增殖反应，对强毒株攻击的保护率为66．7％，高于peDNA3 F裸质粒DNA疫苗注射免疫组(50％)。上述结果初步提示减毒沙门氏菌为载体传递DNA疫苗具有良好的安全性、稳定性和免疫原性，为研制低成本、实用化的口服禽类DNA疫苗奠定了基础。 经过近年来的大量研究，已基本上对核酸疫苗临床应用的许多要素作了全面的评估，主要有核酸疫苗的免疫学机理、疫苗的安全性、有效性、临床应用效率、免疫保护耐受和免疫关联等，另一方面则是大量的传染病病原体和非传染病的核酸疫苗的研究如雨后春笋般涌现，例如流感病毒、HBV、HCV、 HIV，肿瘤防治，基因治疗自身免疫、变态反应等。目前FDA已批准一些DNA疫苗进行人体试验，例如HIV的DNA疫苗。 |
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