荧光PCR的12种异常扩增曲线分析​

原因分析：

（1）PCR前期过程中，试剂和模板没有得到充分的混匀，导致信号的不稳定，反应几个循环之后，模板和反应液开始混匀，荧光信号就变得稳定。

8、内参基因扩增曲线未起

图9 异常扩增曲线（8）

原因分析：

（1）试剂配制没充分混匀，分装不均匀，有效成分低。

（2）模板提取失败，或者污染降解。

（3）采样不准，没有样本。

解决方案：

（1）检查试剂，更换新试剂，双试剂检测。试剂配制充分混匀，分装准确。

（2）重新提取样本。

（3）重新采样检测。

9、标准曲线异常，线性关系不佳R2<0.9（下图为正常曲线）

图10 异常扩增曲线（9）

原因分析：

（1）标准品加样误差，标准品出现降解。

（2）模板中存在抑制物。

（3）试剂缺陷，引物或探针不佳，重新设计。

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