混菌固态发酵豆渣生产菌体蛋白饲料生产条件的研究

1.8 混菌固态发酵培养基配方的筛选

1.8.1 培养基不同初始含水量的选择

按照豆渣：麸皮=4：1（干重比，豆渣、麸皮和水分总和为100%），添加KH2PO4、氯化钠、硫酸镁、葡萄糖、硫酸铵、尿素，分别占豆渣和麸皮总量的2%、1%、0.5%、2%、0.2%和2%，含水量分为30%、40%、50%、60%、70%和80%共6个水平，将发酵料充分搅拌，混合均匀，以40 g的瓶装量装到罐头瓶中，然后接种液按10%的接种量（体积/质量）接入到发酵料中，于28~30 ℃恒温箱中培养96 h，分析测定其粗蛋白质含量、蛋白酶活力和纤维素酶活力。

1.8.2 pH值的确定

为了确定不同的pH值对发酵产物的影响，本试验使用冰醋酸和氢氧化钠溶液调节固态发酵料中的酸碱度，并将其分为3.5、4.5、5.5、6.5、7.5和8.5共6个水平进行试验，培养96 h，分析测定其粗蛋白质含量、蛋白酶活力和纤维素酶活力。

1.8.3 氮源的选择

选择尿素、硫酸铵、硝酸铵、硝酸镁和硝酸钠为试验氮源。在接种混合菌种组合的无氮平板培养基的不同位置点上不同的氮源，每一个平板点一种氮源，每一种氮源三个平板。观察并测定生长圈直径，筛选出生长圈直径大的氮源，然后将筛选出来的氮源分为几个不同的添加水平，通过生长圈测定进一步试验，最后，通过固态发酵试验确定不同氮源之间的比例。

1.8.4 辅料的筛选

按照豆渣：麸皮：辅料=8：1：1（干重比，料和水分总和为100%），在上述确定的含水量、pH值和氮源的基础上，再添加KH2PO4、NaCl、硫酸镁和葡萄糖，分别占料的2%、1%、0.5%和2%，选择肉粉、豆粕、鱼粉、酒精粉、棉粕、玉米秸秆、醋糟、玉米粉和麸皮作为9种辅料，将发酵料充分搅拌，混合均匀，培养96 h，分别测定发酵产物的粗蛋白相对提高率、纤维素酶活力和蛋白酶活力。

1.8.5 培养基组成的优化

在单因素试验的基础上，设计了四因素、三水平L9（34）正交试验，分别考察了初始含水量（因素A）、pH值（因素B）、含氮量（因素C）和硫酸铵与尿素的比例（N/N，因素D）对发酵产物的影响主次和最优组合。发酵条件为：豆渣：麸皮：醋糟=8：1：1，接种量10%，接种比例1：1：1，瓶装量40 g，28~30 ℃恒温培养96 h，65 ℃干燥，粉碎后测定发酵产物中粗蛋白质含量。

1.9 分析方法

粗蛋白测定：采用微量凯氏定氮法（GB/T 14771—1993）；纤维素酶活力的测定：CMC（羧甲基纤维素）法；蛋白酶活力的测定：根据董晓燕方法测定。

1.10 统计学分析

采用SPSS17.0进行方差分析和多重比较。结果用“平均数±标准差”来表示。

2、结果与分析

2.1 不同初始含水量对发酵产物的影响

对于固态发酵，发酵料的初始含水量是影响微生物生长和繁殖的一个重要因素，它直接影响到发酵产物的利用价值，结果见图1和图2。

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