①目的 检测被检血清样品中猪口蹄疫抗体的效价。
②材料 猪口蹄疫(○型)正向间接血凝标准致敏红细胞 (由兰州兽医研究所提供),标准阳性、阴性血清,稀释液,96 孔"V"型有机玻璃微量血凝板,微量加样器,滴头，被检血清等。
③操作 将待检血清置60℃水浴中灭活30分钟,用微量加样器对血凝板上的每孔加入25微升稀释液。取25微升待检血清加到第一孔,用加样器以吸人与排出的动作混合3-4次,取出25微升放人第二孔混匀,依次到第九孔,取出25 微升弃掉。血清稀释度从第一至第九孔分别为1：2,1：4, 1：8,1：16,1：32,1：64,1：128,1：256,1：512(第一排的 10－12孔设阳性血清对照、阴性血清对照和抗原对照)。每孔 加入25微升致敏红细胞,振荡1-2分钟,置37℃温箱或室温下反应1－2小时或更长时间，然后判定检测结果。
④判定标准
"一" 红细胞沉底,呈圆点状,无凝集现象。
"+" 红细胞大部分集中于中央,周围只有少数凝集,即 25%凝集。
"++" 红细胞呈薄层凝集,中心致密,边缘松散,即50%凝集。：
"+++" 红细胞凝集程度较上有所增加,即75%凝集。
"++++" 红细胞呈薄层凝集,布满整个孔底或边缘,卷曲呈荷包蛋边状,为l00%凝集。
结果判定：以出现50%凝集(++)的血清最高稀释度为该血清的间接血凝价。
(4)乳胶凝集试验(LAT)
本法在猪病中主要用于伪狂犬病和萎缩性鼻炎的诊断,是用其病毒致敏乳胶抗原来检测被检猪的血清、全血或乳汁中的抗体,具有简便、快速、特异、 敏感的优点。
①材料 伪狂犬病病毒致敏乳胶抗原,伪狂犬病阳性血清、阴性血清,稀释液,玻片,吸头,被检血清或全血或乳汁(通常采初乳,经3000转/分钟离心10分钟,取上清液作待检样品)
②试验方法
定性试验：取被测样品(血清、全血或乳汁)、阳性血清、阴性血清、稀释液各1滴,分置于玻片上,各加乳胶抗原1滴,用牙签混匀,搅拌并摇动1－2分钟,于3－5分钟内观察结果。
定量试验：先将血清在微量反应板或小试管内作连续倍比稀释,各取1滴依次滴加于乳胶凝集反应板上,另设对照 (同上),随后各加乳胶抗原1滴。如上搅拌并摇动,然后判定。
③结果判定 首先对照组要出现如下的结果,本试验才能成立：阳性血清加抗原呈"++++"阴性血清加抗原呈"一"，抗原加稀释液呈"一"。
"++++" 全部乳胶凝集,颗粒聚于液滴边缘,液体完全透明。
"+++" 大部分乳胶凝集,颗粒明显,液体稍混浊。
"++" 约50%乳胶凝集,但颗粒较细,液体较混浊。
"+" 仅有少许凝集,液体混浊。
"一" 液滴呈原有的均匀乳状。
以出现"++"以上凝集者，判为阳性凝集。
2.沉淀试验
沉淀试验的原理是：利用可溶性抗原如细菌的培养滤液、病毒的可溶性抗原和血清等,与相应的抗体结合,在电解质存在时,可形成肉眼可见的白色沉淀物。参加沉淀反应的抗原,称为沉淀原，抗体叫做沉淀素。沉淀试验的具体方法有多种,如环状沉淀试验、琼脂扩散试验和免疫电泳等。在猪病的诊断中,目前最常用的是琼脂扩散试验。现将本试验简要介绍如下。
琼脂扩散试验，是根据沉淀试验的原理,抗原和抗体可在琼脂凝胶中扩散,并由近及远形成浓度梯度，当抗原、抗体的特异性互相对应时,它们在琼脂基质中适合比例下相遇,便可相互结合,形成抗原-抗体的结合物,分子量相应增加,颗粒变大,故在琼脂凝胶中不再扩散,在抗原、抗体比例较适合的位置上形成白色可见的沉淀线,此种沉淀反应,称为琼脂免疫扩散试验，简称"琼扩"。本法可用已知抗原测定未知抗体,反之亦然。在猪病的实验室诊断中，常用于猪伪狂犬病的抗体检测,也曾有用此法检查猪瘟、猪水疱病和猪痘等疾病的报道。现以检测伪狂犬病的抗体为例，将其操作方法介绍如下。
(1)材料 伪狂犬病标准琼扩抗原,阳性血清,阴性血清, 待检血清(56℃灭能30分钟),生理盐水,打孔器,微量移液器,培养皿,琼扩琼脂(配制方法：含有0.1%石炭酸的磷酸缓冲盐水,加入1%的优质琼脂,在沸水中融化均匀,若有杂质, 须用纱布过滤,然后分装于盐水瓶内,保存备用)。
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