安徽禽群高致病性禽流感血清学横断面研究与风险因素分析

摘要：为掌握安徽省禽群的禽流感免疫抗体水平以及引起免疫不合格的主要风险因素，在 2018 年春季集中免疫前，对安徽省7个市开展了H5 和 H7 亚型禽流感血清学检测和问卷调查。按照分层随机抽样方法，在 7 个市选择种禽场、蛋禽场和肉禽场，共 140 个养禽场，在每个养殖场内随机抽取 35 份血清样品，进行 HI 抗体检测，并根据检测结果，计算群体水平的真实免疫合格率 / 阳性率；将 H5 或 H7 亚型禽流感抗体群体合格率低于 70%  的养禽场定义为免疫不合格场，进行单因素风险分析。结果显示：安徽省 7 个市 H5（Re-8 株）和 H7N9（Re-1 株）的场群真实抗体合格率 / 阳性率分别为 67.7%（95%CI：60.0%~75.4%）和 39.8%（95%CI：31.7%~47.9%），62 个养禽场的 H5 或 H7 亚型抗体未达标（＜70%）；存栏量越小（P=0.046）、免疫次数越少（P=0.016），H5 或 H7 亚型免疫抗体不合格的可能性越高（P ＜ 0.05）；存栏量小于 4 000 羽、免疫后时间≤ 21 d 或≥ 91 d、家禽日龄≤ 26 或≥ 2 200、免疫次数≤ 1、规模化饲养鹅，以及不使用“H5+H7”二价灭活疫苗（OR=2.66，95%CI：1.34~5.35）、周边 3 km 内有野禽栖息地（OR=2.78，95%CI：1.10~7.65）的养禽场的 H5 或 H7 亚型免疫抗体不合格风险相对较高。结果表明：2018 年春季安徽省 7 个市 H5、H7 亚型禽流感免疫抗体保护率下降幅度明显，需要及时开展春季集中免疫；养禽场规模、类型以及家禽种类、是否免疫疫苗、免疫次数、养禽场周边是否有野禽栖息地等，均与群体的禽流感免疫抗体合格率显著相关，因此在制定强制免疫计划时，应视情况进行分类指导，实时补免或增加免疫次数。此外，养禽场选址时应尽量避开野禽栖息地。本研究为决策部门制定禽流感免疫方案提供了技术支撑。  

关键词：高致病性禽流感；H7N9；免疫；风险因素；安徽

高致病性禽流感一直是困扰全球养禽业发展的主要禽病之一，被世界动物卫生组织（OIE）列为须通报动物疫病  ，我国将其列为一类动物疫病。2004 年开始，H5 亚型 HPAI 被我国列为强制免疫  和监测病种 。H7N9 流感 2013 年首次被报道，期初对家禽的致病性有限，后于 2017 年上半年变  异为高致病性毒株，并在湖南、河南、河北、天津、安徽等地引发多起家禽疫情 。为此，农业农村部将 H7 亚型（H7N9 株）与 H5 亚型（Re-8 株）一并纳入强制免疫范围，并研发了重组禽流感病毒二价灭活疫苗（H5N1 Re-8 株 +H7N9 Re-1 株）（以下简称“H5+H7”二价苗）用于集中免疫。为掌握安徽省禽群的禽流感免疫抗体水平以及引起免疫不合格的主要风险因素，在 2018 年春季集中免疫前，在安徽省 7 个市选择规模养禽场，采集家禽血清样品进行 H5 亚型（Re-8 株）和  H7N9 亚型流感病毒抗体检测，并分析导致免疫不合格的主要风险因素，以期为决策部门制定免疫方案提供技术支撑。 

1　材料与方法  

1.1　目标群  根据往年国家禽流感参考实验室对安徽省的禽流感检测阳性结果，结合 2018 年春季政府采购  “H5+H7”二价苗下发情况，选择宿州、阜阳、合肥、六安、滁州、宣城、芜湖 7 个市作为本研究的重点监测区域，将 7 个市的种禽场、蛋禽场（含蛋用和肉蛋兼用型）和肉禽场家禽作为目标群。  

1.2　抽样策略和样本量  采取先抽取群体再抽取个体的抽样策略。

用估计流行率方法，设90%的群体抗体合格率（p）、95% 的置信水平（CL）和 5% 的可接受误差（d），根据公式 N=1.962×p（1–p）/d2 计算，共需抽取140 个场。根据安徽省畜牧业统计数据，按 1:3:6  的比例，确定种禽场、蛋禽场、肉禽场的抽取场数，然后随机抽取。按照估计流行率方法，预设 90%的个体流行率、95% 的置信水平和10% 的可接受误差，在每个场内随机采集35 份家禽血清样品。  

1.3　问卷调查与采样检测  问卷设计考虑到与禽流感群体免疫抗体合格率相关因素，主要包括养殖场基本情况、免疫情况  和周边环境等。由省级动物疫控中心召集被选养殖场所在县级动物疫病控制中心相关技术人员，开展问卷填写培训并统一采样要求，再由县级疫病控制中心负责现场调查和采样。每只家禽采血 2 mL，2 500 r/min 离心取血清。依据国家标准（GB/T18936—2003）检测血清中的 HI 抗体。依据农业农村部规定（个体 HI 抗体效价≥ 24 为免疫合格，个体免疫抗体合格率≥ 70%，为免疫合  格群体），设定 H5 亚型（Re-8 株）和 H7 亚型（H7N9 Re-1 株）禽流感病毒群体免疫抗体合格率均≥ 70%，为免疫合格场，任一项低于 70%，为免疫不合格场。 

 1.4　数据分析  

1.4.1　群体免疫抗体合格率计算 一般情况下，群体表观免疫抗体合格率（HAp）为检测到的免疫抗体合格群占抽样研究群的比值。对分层得到的群体免疫抗体合格率进行直接标准化计算后，将其  与试验敏感性（Se）、特异性（Sp）、个体抽样  数量（n）一起带入公式 HSe=1–[1–p×Se–（1–p）×  （1–Sp）]  n ，HSp=Spn 和 HTp=（HAp+HSp–1）/  （HSe+HSp–1），计算群敏感性（HSe）、群特异性（HSp）和群体真实免疫抗体合格率（HTp）。 

 1.4.2　统计方法　将与禽流感群体免疫抗体不合格的相关风险因素，包括养殖场地理位置、类型、家禽种类、存栏量、周边环境和免疫情况，用Excel 录入相关数据后，用 SPSS 20.0 软件，对分 类有序变量进行点二列相关系数分析、描述统计和哑变量二元 Logistic 回归分析，对分类无序变量进行哑变量二元 Logistic 回归分析；对二分类变量，用 Epi Info 7 软件进行单因素回归分析。  

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