上兽研：非洲猪瘟检测与诊断技术要点（1.0版）

时间：2019-09-12 点击：次来源：中国农科院作者：上海兽医研究所 - 小 + 大

（四）样品采集、包装与运输

1. 采样方法

ASF 样品有效而准确采集是实现 ASF 快速精准检测的非常关键步骤。当疫情暴发（被动监测）时，应针对患病猪、死亡猪及猪舍环境进行采样;而在常规监测时，应对 ASFV 易感猪群及环境（如出猪台、场区大门等风险较大的地方）进行采样;如果是针对处于精准清除的群体，采样的数量可以适当加大。采样应注意避免交叉污染，并在采集每头猪只后更换一次性手套。触碰猪只、料槽、栏杆后，及时更换一次性手套。采血时，必须做到每采集 1 头猪只更换 1 个新的针头，以免造成 ASFV 传播。提交到诊断实验室的相关样品应有清晰且保存持久的标签，样品质量良好。所有采样后的防护用品焚烧或高压处理。

样品类型：

口鼻拭子：将每头猪口、鼻拭子收集于同一采样管中，以便提高检测的准确性和减少工作量。拭子装于 Eppendorf 管内，建议将样品保存于 4℃，立刻送检，没有实验条件的应在 24 小时内送至有资质的实验室。

全血：采血过程中应保持无菌操作。采血前，先用酒精棉对采血部位进行局部消毒。采血完毕，进行局部消毒并用干棉球按压止血。

使用含有抗凝血剂（EDTA-紫色盖）的真空采血管从颈静脉、前腔静脉或耳缘静脉抽取全血。如果动物已经死亡，可立即从心脏中采血。避免使用含肝素的真空采血管（绿色盖子）。

血清：使用未加抗凝剂（红色盖子）的真空采血管从颈静脉、前腔静脉、耳缘静脉采血，或剖检过程收集血液样品。静置分离后，收集血清。如果血清是红色，这表明样品发生了溶血。通常已经死亡动物的血液样品易发生溶血。血清样品在分离后可以立即开展检测，如果需要储存，对于抗体检测，储存在-20℃，但是对于病毒检测，最好储存于-80℃。

器官和组织样品：可采集脾脏、淋巴结、肝脏、扁桃体、心脏、肺和肾脏样品。脾脏和淋巴结的病毒含量最高。对于死亡时间较长的动物，可采集骨髓样品，也可采集关节内组织液。建议将样品保持在 4℃，尽快提交给实验室。如无法及时送样，可将样品储存在冷库或液氮中。样品用 10%缓冲福尔马林浸泡 30 分钟以上，病毒可被灭活，可用于 PCR 检测。样品的最小需求量：血清 1mL；全血 1mL；组织样品 10g。

环境样品：可多点采集养殖场软蜱等媒介和环境拭子，如粪便、泔水、饲料等。

软蜱等媒介样品：钝缘蜱可以用于检测 ASFV。有三种收集技术：手动收集、二氧化碳诱捕和真空吸引捕捉。收集后，应让蜱保持存活或直接储存在液氮中，避免 DNA 降解。

其它环境样品：以区块为单位，对风险等级进行区域采样。如猪场内所有墙体、地面、设备等表面进行全覆盖采样。

生产区内：包括各区间猪舍内所有区间单元墙体、地面、风机、地沟、设备、水线、料线等。采样应全覆盖包括死角、料槽底部等不易采集到的位置。

生产区外：对可能的风险区域进行采样，包括出猪台、场区大门、料塔、下水道、员工宿舍、储物间、浴室、办公室、餐厅厨房、车辆、水源等所有可能受到污染的区域。建议样品 4℃以下保存。

2. 样品的记录、保存、包装和运送

为保证准确诊断，必须在适当温度下、以最快速度，将样品仔细包装、做好标记和相关记录，以最快路线送到最近的农业农村部指定的实验室。样品运输必须遵守农业农村部《高致病性动物病原微生物菌（毒）种运输包装规范》等规定。

采样之前必须致电相关实验室，确保遵循正确的样品提交程序，保证所送样品能在第一时间完成检测及储存。

做好样品运输过程中的安全保障工作，避免在运输途中感染其他动物，避免样品被污染。

运送的样品必须附有足够数量的冷却材料（如冰袋），以防变质。

采样信息记录

采样同时，应填写采样单。